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动物组织样本RNA提取试剂盒

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01

动物组织样本RNA提取说明书

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215K

常见问题

一:RNA样本筛选及储存要点概述

RNA在细胞内极易降解,样本选择时一定要选取新鲜的样本组织或者取样后迅速低温处理(液氮速冻);样本出现多次反复冻融后,RNA得率会严重下降,也会导致RNA降解;RNA提取环境要保持无RNA酶污染;

二:(RNA)如何处理含有微量EDTA的Buffer EB在(RNA)试剂盒中?

试剂盒中Buffer EBRNA专用)中含有少量EDTA,可能影响下游实验,使用时适当稀释,如果用其他洗脱液洗脱,要确保PH>7.5PH过低影响洗脱效率;

三:(RNA)离心柱漂洗完成后操作注意事项

离心柱漂洗完成后,尽可能烘干柱膜上残留乙醇,残留乙醇会影响洗脱效率和下游实验效果;柱膜也不建议过度干燥,没有乙醇味道残留最好,如果过度干燥可能影响RNA溶解;如果A260/230值过低,说明样本提取过程中漂洗不彻底,有盐离子残留,建议增加漂洗次数;

四:RNA提取中A260/280比值分析:低于1.9的情况说明什么?

对于RNA提取,A260/280<1.9说明有可能存在DNA污染或者蛋白污染,如果洗脱样本时没有使用Buffer EB,而使用ddH20(确保无RNA酶),比值或偏低,因为Ph值会影响吸光值,并不表示样本纯度低;

五:如何判断RNA的完整性

RNA完整性可以通过超微量核酸检测仪检测或者琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1%1XTAE电泳缓冲液)来判断;一般样本RNA电泳条带为两条带,对于植物样本,有可能存在叶绿体RNA干扰,条带数量大于4条,并不表示RNA提取发生降解;

六:如何有效防止RNA污染?

RNA容易受到环境污染导致RNA严重降解,建议实验过程中注意更换实验手套,使用所有耗材应该均无RNA酶的一次性耗材;

电泳环境受到RNA酶污染,也会造成RNA降解,电泳检测不准确,确保电泳过程中电泳缓冲液,上样缓冲液无RNA酶污染;

七:植物RNA样本处理量差异的处理方案

对于植物样本,样本处理量无法统一确定,对于一般样本(烟草,拟南芥等),提取量不超过100mg鲜重组织或者20mg干重组织,对于复杂样本(水稻,玉米,榆树等),建议初始样本量不超过50mg鲜重或者10mg干重组织;如果需要较高的RNA量,可以采取多管浓缩的方法提取RNA;

如果离心时堵塞离心柱,建议减少初始样本量;

八:植物RNA样本提取试剂盒选型指南

RNA提取一般是传统TRIzol方法和改进的柱式方法;对于TRIzol法进本可以提取大部分样本RNA,但是对于多糖多酚植物样本,建议使用者尽量选择具有针对性的试剂盒(参见目录),传统TRIzol法无法有效去除多糖多酚这些次生代谢物;

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